植物组织总RNA提取试剂盒

      本试剂盒专门设计用于提取植物组织的RNA，提取的RNA固体可在室温保存三个月或-20℃长期保存。用创新化学裂解 与选择性沉淀技术，30分钟内完成RNA提取。产物纯度高，适用于RT-qPCR、RNA-seq、cDNA合成等下游实验。

适用材料： 适用于植物叶，花，茎，芽，新鲜果实，种子，根等组织和器官。也可适用于许多常见的动物组织。 不适合植物干种子和部分块根，块茎等营养器官。

步骤1 样本处理 （样本40-50mg不要多加样本）

1-1研磨匀浆法（推荐：简单，低成本） ① 将研磨管适配器置于-20℃预冷≥1小时，确保匀浆过程低温控制 ② 将研磨珠、270μl植物解离剂（或者200μl试剂1、70μl试 剂、2μl 还原剂）和50±5mg新鲜植物组织材料加入2m l研磨管中，立即进行珠磨匀浆，打碎组织（匀浆设置，请咨询商家或厂 家）

1-2液氮匀浆： ① 称取50±5mg的新鲜植物组织，放于预冷研钵中，用液氮研磨成粉状②将研钵放冰上加入270ul解离剂（刚加入解离剂、解离 剂可能因为研钵温度低而结冰。待解离剂融化后）继续研磨 ③加入1ml沉淀剂进行充分研磨混匀，将所有成分倒入1.5ml离心管 中室温放置5-10分钟，然后室温12000rpm离心5min；⑤取1ml上清液。然后进行步骤3 沉淀RNA（上清液加异丙醇550ul）

【注意】样本多加会导致体系变化影响RNA质量和得率！【提示】匀浆后，可以稍离心，将管盖上的匀浆组织甩到管底。

步骤2 沉淀杂质 ①加沉淀剂1mL到前面的管子中，颠倒10次以上；②室温静置10min；③12000rpm离心5min；④转移1ml上清液到新离心管。 【提示】有时候，有碎片/脂肪漂浮属正常现象，勿重复离心。RNA在上清中。

步骤3 沉淀RNA ①上清加异丙醇550μL，颠倒5次以上；②室温静置5~10min；③12000rpm、室温下离心7.5min；④快速倒掉上下液相，保留管底 的沉淀。 【提示】沉淀不可见属正常，后续乙醇洗涤时可观察。快速倒掉上下液相，可防止其中间的杂质相挂在离心管壁，影响产品质量。

步骤4 洗涤与保存 ①加70%~80%乙醇1mL悬浮沉淀；②12000rpm离心5min，弃乙醇；③重复洗涤1次；④倒扣滤纸上数十秒，平放晾干；⑤加 RNase-Free水30~50μL溶解，冰上备用。（6）在步骤 ③中改用无水乙醇代替乙醇溶液，最终可以获得干燥的RNA固体。

【保存】固体RNA室温可存放3个月、-20℃长期存放。RNA溶解后，立即使用或放于-80℃冰箱中长期保存。

【注意】第一次洗涤不要用无水乙醇、如果需要长期保存第二次洗涤用无水乙醇，也可以用70%-80%乙醇。

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